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5 {' _3 j! j; j% L: C 中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－03
" c# b/ m* l5 wAn Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, X......; @$ O H% c3 U$ q( ]5 _ S% s* y
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中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－03. F) o0 }. [$ q- n U
An Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, Xuzhou 221008, China) 0 q4 w* b( L& W
Abstract: Two strains of high-effective, lubricating oil degrading bacteria, ZL1 and ZL2, were screened out from oil-contaminated soil, which were preliminarily identified as flavobacteriun and tnicrococcus. The effects of temperature, oil content and pH value on their oil-degrading capacities were dletermined by orthogonal experiment of growth conditions. A degrading capacity experiment was carried out with an initial wastewater oil content of 270 mg/L. The experimental results showed that the oil removal rates by the strains ZL1 and ZL2 from the in-oculum in about 2 days were up to 67. 9% and 76. 2% respectively and the adaptation range of strain ZL2 to oil content and pH value was wider than that of ZL1. Key Words: lubricating oil; oil-containing wastewater; wastewater treatment; microorganism; flavobacteri-un; micrococcus
$ J/ X6 M1 a$ N& ]+ [+ b) t 近年来，国内外对石油及兵产品的微生物降解研究常见报道，却鲜见机油废水微生物降解方面的研究。本试验目的是通过常规微生物驯化方法，以市售机油为唯一碳源，从油污土壤中分离筛选出机油高效降解菌株，并对其生长条件及降解特性进行研究，以期进一步应用于含油污水的治理。
$ F3 A% p5 K, v5 g, p4 U$ `$ e1 材料与方法
7 I. h7 U: {4 t3 b) W1．1 土壤样品 某石油库贮油罐附近的石油污染土壤，取样3份，按含油量由多至少编为1＃，2＃，3＃。1．2 培养基 本试验选取两种无机基础培养基，（用蒸馏水配制并高压蒸气灭菌），编号分别为1＃，2＃，组成如下： 1＃基础培养基：p（KH2PO4）＝0.5g／L，ρ（K2HPO4）＝0.5g／L，P（MgSO4·7H2O）=0.2g／L，ρ（NaCl）=0.2g／L，p（CaCl2）＝0.1g／L，ρ（NH4NO3）＝1.0g／L，MnSO4痕量，FeCl3痕量。 2＃基础培养基：p（NaNO3）=2.0g／L，ρ（KH2O4）＝0．2g／L，ρ（MgSO4.7H2O）＝0.2g／L，ρ（酵母浸膏）＝1.0g／L． 含油培养基是向上述无机基础培养基中加入适量机油。固体培养基中加入质量分数为0．2％的琼脂。1．3 优势菌筛分试验1．3．1 选择富集培养 称取土样各10g，加入到500mL1＃含油培养基（含机油4mL）中，调pH值7.0，通气恒温30℃培养48h后，分别移取上述培养液5mL于45mL1＃，2＃含油培养基（含机油2mL）中，恒温30℃振荡培养。1.3.2 平板分离 制作1＃，2＃固体含油培养基平板苦干，用接种环蘸取振荡培养较好的菌液在相应平板划线，恒温30℃培养48h后平板划线分离，重复数次。选择生长状况良好的菌株进行平板扩大培养。1．4 生长条件正交试验 在保证供氧和氮、磷营养前提下，选择温度。油的质量浓度（以mg／L计）和pH值作为本次实验的三个因素进行三水平实验，方案见表1、表2。将平板培养48h的菌体刮下，5000r／min离心5min，分离得到湿菌体。向方案中每个样品加入0.5g湿菌体，培养60h后测定样品中油的质量浓度。
( \1 C/ ^$ U9 D$ r T) _4 M表1 ZL1菌株正交试验方案及试验结果 - t8 U# Y* q0 Q/ T" N% ]5 f' f
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' v9 V( T9 h3 c7 d% R表2 ZL2菌株正交试验方案及试验结果
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分组号3 q6 @3 h" g, k: u- Z
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' y' ~ {4 e6 v& v降解测量ρ（油）/（mg.L-1)
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1.5 降解能力试验 配制机油质量浓度为270mg／L的含油培养基1L，投入小型间歇反应器中，加入离心分离得到的湿菌体5g，通气恒温30℃培养，间隔12h取样测定其含油量。1．6 测试方法 用紫外介光光度法测定。 ! U$ @ u4 A6 E) X' `
2 结果分析
6 j2 y' u3 A. D/ j+ `& C; ~! p0 p0 H2．1 优势菌筛分试验 富集培养过程中，1＃土样的培养液出现的泡沫较多，乳化现象明显，菌液也较为粘稠，分离出较多的菌株，说明土壤中的石油烃能刺激石油降解菌的生长。经过选择富集培养、平板分离出4株以机油为唯一碳源的菌株，编号为ZL1，ZL2，ZL3，ZL4，性状见表3。进一步培养后筛选出降解性能较好的ZL1（1＃培养基）和ZL2（2＃培养基）进行正交试验和连续培养试验。
" C0 M# h- o+ o5 M- F! C表3 4株机油降解菌形态特征 7 @. f4 `3 K% X5 W# b# t7 }
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菌落颜色
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淡黄& @9 T8 |2 H( q/ B& f( y
淡黄
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菌落形态8 K2 i, g2 D+ R7 q7 A ~
不透明，微隆起，全缘，
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半透明，圆形，隆起，
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+ b" k" v- n) U" b( g4 J5 V& n% H! ]5 L, B5 J# }
8 ?6 y% K+ d" A) d5 t光滑，有光泽- F3 }; q. |' q" _0 \8 A: y9 I
光滑，较干燥
6 F: t4 E9 h* K2 I, ?光滑，有光泽
! F4 K. Z( \3 `4 l& r较湿润, ?& N# e* q g1 T; p* S8 I* E
5 s+ W9 L3 r& c' M! y% _菌体形态
7 a% E& I) p$ p1 R) |短杆; w" ~5 l$ X+ s) R! I+ `& j
球形! `+ Z5 V& i" [& E
杆状
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/ T5 V; ~# [2 \5 ?
初步鉴定
. Y) W ~4 M9 o- L黄杆菌属$ O) j% }; E1 d( q2 y I
微球菌属! f" M% R [% r$ `# ?0 l& U
假单胞菌属
+ x- ` \ Q; b. |8 s/ ~7 }1 B酵母菌属2 I' C+ M4 |3 q4 z& q
2．2 生长条件正交试验 ZL1，ZL2菌株按设定的正交试验方案进行试验，测定其剩余含油量，以降解油量作为考察指标，计算结果见表2、表3。分析极差值R可以看出：ZL1菌的R温度为128，ZL2菌的R温度为73，均为最大极差值，说明温度是影响降解效果的主要因素。25℃ZL1菌降解机油能力较强；油质量浓度越低降解效果越好；pH值为7时，降解效果最好，说明ZL1菌适于在中性条件下生长。30℃ZL2菌降解机油能力较强；机油的质量浓度在368-767mg／L范围内对降解效果影响不大，以ρ（油）=574mg／L时降解效果最明显，还应进一步扩大试验的油含量范围以确定油含量对ZL2菌降解能力的影响；pH值在4－8范围内对降解效果的影响也不显著，其中PH值为6时降解效果最好，说明ZL2菌较适于在中性偏酸条件下生长。2.3 降解能力试验 向1L油质量浓度为270mg／L培养液中投加5g湿菌体进行间歇培养，考察ZLI，ZLZ菌的降解能力，结果见图1。由含油量与培养时间关系曲线可以看出：ZL1，ZL2菌被加人含油培养基后很快适应环境，随着培养时间的增长，含油量不断下降。ZL1菌在30h左右去除率达到最大，后含油量下降缓慢，到60h左右曲线趋于平直；ZL2菌在20h左右去除率达最大，48h左右曲线趋于平直。曲线说明ZL1，ZL2菌适应能力较强，ZL1菌在0－60h内生长旺盛对机油的去除率可达67．9％，ZL2菌在0－48h内生长旺盛，对机油的去除率高达76.2％，试验后期降解曲线趋于平直，含油量基本不再变化，可能是由于机油中的一些重组分难于降解的原因。
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( n e7 y: v8 {$ w# t" t! z3 结论
0 A0 s% w5 E/ j. z& Q3 w ①石油污染土壤较适于做高效石油降解菌驯化菌源。筛选到两株高效机油降解菌ZL1，ZL2。通过正交试验得出ZL1黄杆菌属适于在25℃，油的质量浓度在424mg／L左右，中性条件下生长。ZL2微球菌属适于在 30℃，油的质量浓度在574mg/L左右，中性偏酸条件下生长。 ②温度对ZL1，ZL2菌的机油降解能力影响较大。ZL2菌的PH值、机油浓度适应范围较广，有较好的应用前景。 ③ZL1，ZL2菌对初始机油质量浓度为270mg／L培养液的去除率分别达到67.9％和76.2％，混合菌株的降解效果有待进一步研究。 0 o9 t( Z/ e% y+ p4 ?- C
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作者简介：刘勤亚（1977－），女，河北石家庄人，环境工程专业硕士在读。& b% G* m2 @5 j# \2 L, ?
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狗仔卡
发表于 2010-2-21 20:12
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