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( u/ m% A& C# s% R) S; l( j3 [' `% p0 i3 b9 B0 j7 H
中图分类号:X703 文献标识码:A 文章编号:1009-2455(200)06-0032-03! s7 H, d0 g$ J3 J6 `/ L
An Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, X......, ^3 C& \. d% W9 z5 H
8 e# L" ?$ y& g$ }. L: n: A
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3 M! F; T. V8 K$ [+ H! V7 d, N" g0 l. y8 {5 X2 H
中图分类号:X703 文献标识码:A 文章编号:1009-2455(200)06-0032-03
) n1 \7 D) E8 ~5 UAn Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, Xuzhou 221008, China) + D- c+ a5 V. Z+ K9 l- Z
Abstract: Two strains of high-effective, lubricating oil degrading bacteria, ZL1 and ZL2, were screened out from oil-contaminated soil, which were preliminarily identified as flavobacteriun and tnicrococcus. The effects of temperature, oil content and pH value on their oil-degrading capacities were dletermined by orthogonal experiment of growth conditions. A degrading capacity experiment was carried out with an initial wastewater oil content of 270 mg/L. The experimental results showed that the oil removal rates by the strains ZL1 and ZL2 from the in-oculum in about 2 days were up to 67. 9% and 76. 2% respectively and the adaptation range of strain ZL2 to oil content and pH value was wider than that of ZL1. Key Words: lubricating oil; oil-containing wastewater; wastewater treatment; microorganism; flavobacteri-un; micrococcus
$ W$ \; l5 y: U! Z) O$ i- r# A 近年来,国内外对石油及兵产品的微生物降解研究常见报道,却鲜见机油废水微生物降解方面的研究。本试验目的是通过常规微生物驯化方法,以市售机油为唯一碳源,从油污土壤中分离筛选出机油高效降解菌株,并对其生长条件及降解特性进行研究,以期进一步应用于含油污水的治理。 4 j% f1 @1 F0 I
1 材料与方法
) x4 [" N* |3 \1 [2 S5 Z: S1.1 土壤样品 某石油库贮油罐附近的石油污染土壤,取样3份,按含油量由多至少编为1#,2#,3#。1.2 培养基 本试验选取两种无机基础培养基,(用蒸馏水配制并高压蒸气灭菌),编号分别为1#,2#,组成如下: 1#基础培养基:p(KH2PO4)=0.5g/L,ρ(K2HPO4)=0.5g/L,P(MgSO4·7H2O)=0.2g/L,ρ(NaCl)=0.2g/L,p(CaCl2)=0.1g/L,ρ(NH4NO3)=1.0g/L,MnSO4痕量,FeCl3痕量。 2#基础培养基:p(NaNO3)=2.0g/L,ρ(KH2O4)=0.2g/L,ρ(MgSO4.7H2O)=0.2g/L,ρ(酵母浸膏)=1.0g/L. 含油培养基是向上述无机基础培养基中加入适量机油。固体培养基中加入质量分数为0.2%的琼脂。1.3 优势菌筛分试验1.3.1 选择富集培养 称取土样各10g,加入到500mL1#含油培养基(含机油4mL)中,调pH值7.0,通气恒温30℃培养48h后,分别移取上述培养液5mL于45mL1#,2#含油培养基(含机油2mL)中,恒温30℃振荡培养。1.3.2 平板分离 制作1#,2#固体含油培养基平板苦干,用接种环蘸取振荡培养较好的菌液在相应平板划线,恒温30℃培养48h后平板划线分离,重复数次。选择生长状况良好的菌株进行平板扩大培养。1.4 生长条件正交试验 在保证供氧和氮、磷营养前提下,选择温度。油的质量浓度(以mg/L计)和pH值作为本次实验的三个因素进行三水平实验,方案见表1、表2。将平板培养48h的菌体刮下,5000r/min离心5min,分离得到湿菌体。向方案中每个样品加入0.5g湿菌体,培养60h后测定样品中油的质量浓度。
) ^# q: X. c. R( G表1 ZL1菌株正交试验方案及试验结果 2 Y, u3 R+ c. w- U6 T
, A& Q9 R. }5 j4 f5 k, D
3 I5 a% m' G% `9 Z" K8 a$ ~. y: i8 }3 g
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分组号
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2 ?2 x% ]2 m) H* i! s测定结果ρ(油)/(mg.L-1)* h! |* U t( Y2 \% p! }: }: o
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102
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14
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3 k% m+ \) D7 X8 O# I$ F 8 l0 P( n+ ~5 w( B/ `
表2 ZL2菌株正交试验方案及试验结果
* r4 y$ l: e- `$ J$ b- [9 q/ M
- X: U) ~! Y" ?: Y3 U& x; q' ]5 K. N0 L# K: c5 Z' G7 ~
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分组号
2 }0 g+ _8 y( Z j( [ H因素
5 b: A2 b( c. n& Y# w! ?测定结果ρ(油)/(mg.L-1)& L7 k# O2 k; q- \5 v" V
降解测量ρ(油)/(mg.L-1)
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1.5 降解能力试验 配制机油质量浓度为270mg/L的含油培养基1L,投入小型间歇反应器中,加入离心分离得到的湿菌体5g,通气恒温30℃培养,间隔12h取样测定其含油量。1.6 测试方法 用紫外介光光度法测定。
8 E$ _' r( ]+ x4 m, ^$ Z2 结果分析
, ~; M b+ m( I! c8 J2.1 优势菌筛分试验 富集培养过程中,1#土样的培养液出现的泡沫较多,乳化现象明显,菌液也较为粘稠,分离出较多的菌株,说明土壤中的石油烃能刺激石油降解菌的生长。经过选择富集培养、平板分离出4株以机油为唯一碳源的菌株,编号为ZL1,ZL2,ZL3,ZL4,性状见表3。进一步培养后筛选出降解性能较好的ZL1(1#培养基)和ZL2(2#培养基)进行正交试验和连续培养试验。 5 e1 ]# r v" F0 J+ m2 Y
表3 4株机油降解菌形态特征 : b; {, M8 O7 E
$ k; [, x2 l4 H
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菌落颜色
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- x2 `- C; l9 s7 T! w菌落形态% x& B$ _5 ? |# h: ?2 _! s- W
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半透明,圆形
4 m- K- Q0 w8 v' ^6 D) W5 ~5 b半透明,圆形,隆起,/ L3 t r6 X$ d+ L7 Y6 M
不透明,米粒状突起,
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光滑,有光泽" |3 B% f9 b6 c$ h n8 I2 Z) S! S! s4 A
光滑,较干燥
0 K3 V! R" W5 r1 b光滑,有光泽; c$ Y$ e1 p2 z; u% ^; z
较湿润
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, M1 h0 O, I* x菌体形态
9 G& Q" \0 t8 T: T7 b* x9 l短杆
- z5 K, V; g% `# H' G球形
6 C; P( h) q# R: z2 }杆状
8 R# x/ F F9 L8 x# Q9 K丝状
& |! T* P3 }: m3 H4 c6 O8 d' O. W1 j, X1 T1 W; U# d+ S
菌体大小/μm) d1 q, t0 ^- H4 Q
(0.3-0.8)×(0.6-1.0)
5 M u2 ~) X0 D8 C$ mΦ0.3! G9 x, m: D" f6 G
(0.5-0.8)×(1.3-5.0)( z$ R: c6 J' ]. T
0.2×(6-60)" J3 E* y5 |1 S. O8 K/ G
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革兰氏染色
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G3 R# a5 n* D3 l3 Y
G
* T. J9 |6 g! Z; }! w8 TG5 a% W; `; L$ U$ O' U
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初步鉴定4 R$ m. a& K7 I) n1 w
黄杆菌属
; c) N8 Y( J- Y4 H微球菌属' H! V/ C D5 c: I
假单胞菌属9 g# K' Z3 X) C1 w W6 z
酵母菌属" i) P* c1 l. W' Q& B
2.2 生长条件正交试验 ZL1,ZL2菌株按设定的正交试验方案进行试验,测定其剩余含油量,以降解油量作为考察指标,计算结果见表2、表3。分析极差值R可以看出:ZL1菌的R温度为128,ZL2菌的R温度为73,均为最大极差值,说明温度是影响降解效果的主要因素。25℃ZL1菌降解机油能力较强;油质量浓度越低降解效果越好;pH值为7时,降解效果最好,说明ZL1菌适于在中性条件下生长。30℃ZL2菌降解机油能力较强;机油的质量浓度在368-767mg/L范围内对降解效果影响不大,以ρ(油)=574mg/L时降解效果最明显,还应进一步扩大试验的油含量范围以确定油含量对ZL2菌降解能力的影响;pH值在4-8范围内对降解效果的影响也不显著,其中PH值为6时降解效果最好,说明ZL2菌较适于在中性偏酸条件下生长。2.3 降解能力试验 向1L油质量浓度为270mg/L培养液中投加5g湿菌体进行间歇培养,考察ZLI,ZLZ菌的降解能力,结果见图1。由含油量与培养时间关系曲线可以看出:ZL1,ZL2菌被加人含油培养基后很快适应环境,随着培养时间的增长,含油量不断下降。ZL1菌在30h左右去除率达到最大,后含油量下降缓慢,到60h左右曲线趋于平直;ZL2菌在20h左右去除率达最大,48h左右曲线趋于平直。曲线说明ZL1,ZL2菌适应能力较强,ZL1菌在0-60h内生长旺盛对机油的去除率可达67.9%,ZL2菌在0-48h内生长旺盛,对机油的去除率高达76.2%,试验后期降解曲线趋于平直,含油量基本不再变化,可能是由于机油中的一些重组分难于降解的原因。
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3 结论 / `) r b0 g0 L4 }( i
①石油污染土壤较适于做高效石油降解菌驯化菌源。筛选到两株高效机油降解菌ZL1,ZL2。通过正交试验得出ZL1黄杆菌属适于在25℃,油的质量浓度在424mg/L左右,中性条件下生长。ZL2微球菌属适于在 30℃,油的质量浓度在574mg/L左右,中性偏酸条件下生长。 ②温度对ZL1,ZL2菌的机油降解能力影响较大。ZL2菌的PH值、机油浓度适应范围较广,有较好的应用前景。 ③ZL1,ZL2菌对初始机油质量浓度为270mg/L培养液的去除率分别达到67.9%和76.2%,混合菌株的降解效果有待进一步研究。 . n6 ^% [* p2 }) d8 C, u
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# Y0 ?+ Q f' ?5 L 作者简介:刘勤亚(1977-),女,河北石家庄人,环境工程专业硕士在读。
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