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中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－03
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中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－036 m: b8 Z2 e1 Y" G
An Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, Xuzhou 221008, China) 5 @6 j/ m1 n5 S: h
Abstract: Two strains of high-effective, lubricating oil degrading bacteria, ZL1 and ZL2, were screened out from oil-contaminated soil, which were preliminarily identified as flavobacteriun and tnicrococcus. The effects of temperature, oil content and pH value on their oil-degrading capacities were dletermined by orthogonal experiment of growth conditions. A degrading capacity experiment was carried out with an initial wastewater oil content of 270 mg/L. The experimental results showed that the oil removal rates by the strains ZL1 and ZL2 from the in-oculum in about 2 days were up to 67. 9% and 76. 2% respectively and the adaptation range of strain ZL2 to oil content and pH value was wider than that of ZL1. Key Words: lubricating oil; oil-containing wastewater; wastewater treatment; microorganism; flavobacteri-un; micrococcus ! w0 Y# @1 }# r, @: j4 X
近年来，国内外对石油及兵产品的微生物降解研究常见报道，却鲜见机油废水微生物降解方面的研究。本试验目的是通过常规微生物驯化方法，以市售机油为唯一碳源，从油污土壤中分离筛选出机油高效降解菌株，并对其生长条件及降解特性进行研究，以期进一步应用于含油污水的治理。
; L% I$ l7 g& M" ^( @5 z1 材料与方法 0 }% m* A" W+ K4 u9 T
1．1 土壤样品 某石油库贮油罐附近的石油污染土壤，取样3份，按含油量由多至少编为1＃，2＃，3＃。1．2 培养基 本试验选取两种无机基础培养基，（用蒸馏水配制并高压蒸气灭菌），编号分别为1＃，2＃，组成如下： 1＃基础培养基：p（KH2PO4）＝0.5g／L，ρ（K2HPO4）＝0.5g／L，P（MgSO4·7H2O）=0.2g／L，ρ（NaCl）=0.2g／L，p（CaCl2）＝0.1g／L，ρ（NH4NO3）＝1.0g／L，MnSO4痕量，FeCl3痕量。 2＃基础培养基：p（NaNO3）=2.0g／L，ρ（KH2O4）＝0．2g／L，ρ（MgSO4.7H2O）＝0.2g／L，ρ（酵母浸膏）＝1.0g／L． 含油培养基是向上述无机基础培养基中加入适量机油。固体培养基中加入质量分数为0．2％的琼脂。1．3 优势菌筛分试验1．3．1 选择富集培养 称取土样各10g，加入到500mL1＃含油培养基（含机油4mL）中，调pH值7.0，通气恒温30℃培养48h后，分别移取上述培养液5mL于45mL1＃，2＃含油培养基（含机油2mL）中，恒温30℃振荡培养。1.3.2 平板分离 制作1＃，2＃固体含油培养基平板苦干，用接种环蘸取振荡培养较好的菌液在相应平板划线，恒温30℃培养48h后平板划线分离，重复数次。选择生长状况良好的菌株进行平板扩大培养。1．4 生长条件正交试验 在保证供氧和氮、磷营养前提下，选择温度。油的质量浓度（以mg／L计）和pH值作为本次实验的三个因素进行三水平实验，方案见表1、表2。将平板培养48h的菌体刮下，5000r／min离心5min，分离得到湿菌体。向方案中每个样品加入0.5g湿菌体，培养60h后测定样品中油的质量浓度。 & F0 J8 f" x6 Q2 b) ]' T& q6 {7 ]% d
表1 ZL1菌株正交试验方案及试验结果
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30( B7 S* K, y! v6 z: A2 C
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102 E# }1 [1 T5 Q. |. l5 }
144; |( a% N; ~ ~& v
165
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R; N" s: U- \( G Q# z! c
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44
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" C/ x( X9 B3 a$ C
5 m4 [; G _3 E% d* x- Q表2 ZL2菌株正交试验方案及试验结果
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$ [* r' F: c+ ]6 N* b
* v2 H) d) h/ Y- b0 ]4 F* H$ X1 C2 h( q/ k
( ~$ W$ S% ~7 f3 F h% ?) L分组号
# e0 g# u/ A5 B, c& n因素4 F, o7 ~! u1 G, N- @
测定结果ρ（油）/（mg.L-1)& e, P8 N9 w* G0 m9 K0 K" u
降解测量ρ（油）/（mg.L-1)% [( {( A8 W1 `
0 @9 y1 Y7 O, K! \ Y6 V/ i温度/
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69 U9 `7 E6 \! \) t) F6 b
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22 q5 Y# }- R, y: W0 O( A0 M0 o
25
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. Q/ ?# x$ T. j2 L6.0: Q: i- P- s# ^- h( B2 `& n
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307
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264* I, H" J* L, x
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3 } S0 h2 W3 ^+ C/ n16
8 G% l: G& f$ ?9 q. `25, H0 x Y* I. Q6 W3 C; p! v3 g
" p* @) T- Y3 n
4 e9 d/ X* H1 x& a7 y1.5 降解能力试验 配制机油质量浓度为270mg／L的含油培养基1L，投入小型间歇反应器中，加入离心分离得到的湿菌体5g，通气恒温30℃培养，间隔12h取样测定其含油量。1．6 测试方法 用紫外介光光度法测定。
9 D7 ?1 P- u( Q7 d/ @/ k2 结果分析
' |2 h7 e/ S1 a) q$ a2 X y# \4 l2．1 优势菌筛分试验 富集培养过程中，1＃土样的培养液出现的泡沫较多，乳化现象明显，菌液也较为粘稠，分离出较多的菌株，说明土壤中的石油烃能刺激石油降解菌的生长。经过选择富集培养、平板分离出4株以机油为唯一碳源的菌株，编号为ZL1，ZL2，ZL3，ZL4，性状见表3。进一步培养后筛选出降解性能较好的ZL1（1＃培养基）和ZL2（2＃培养基）进行正交试验和连续培养试验。
- s' b" W- v, g2 O1 M表3 4株机油降解菌形态特征
$ p* M' L+ F0 v: h( ?) \: u! ]/ D* I6 j+ z
# K# S$ a7 ?, k# t7 L$ w4 G; C: T6 i1 t) o5 s/ k2 O4 f
" T8 P; x8 Q' w( v9 J, @形态特征
# ^# v& G' Y) `+ K! p" lZL1
7 n- U) S# I* ZZL24 t; }8 r$ \; @. e% g, h
ZL34 \( T& {) |! r; T( r; o
ZL40 |5 Y1 N0 S8 q. Z$ H
/ r7 K4 r3 _7 C# P菌落颜色
Q2 U9 [' k7 S, f粉红. R( A7 ^* ~1 B/ N
淡黄
6 E5 X* a- {% Q: k淡黄
, _0 W5 \8 b/ p4 X! @1 J" K粉红- c$ j t5 Y% Q) k+ C
1 G( m$ w7 ^. B5 I" v
菌落形态- u* X( i: q/ w3 o+ [1 A
不透明，微隆起，全缘，. J2 l4 ~& t$ m4 N
半透明，圆形
; |9 E# j0 M: y* G% _半透明，圆形，隆起，
5 V. l8 T) \: J- n$ {% S不透明，米粒状突起，: F' z! u6 `7 C, Q2 `
6 Q" k3 Z& e( [1 z" {$ J8 e& Q % z7 g! W( |. [8 z! Y, O
光滑，有光泽
/ ~( r, J7 G) ~1 |6 R光滑，较干燥
5 L: i% i2 M2 W; o; ^光滑，有光泽" L+ w% f- L; I4 Z5 `& w
较湿润/ Q! I, ~* d6 o
$ }3 R( f3 f: U3 O菌体形态+ m5 t9 M) g! V+ p
短杆5 o8 B5 v: K7 q5 u/ p: @
球形6 u; s$ C; i1 A d% H1 W6 R
杆状
- S! R- `( u, G丝状7 z% y1 P2 w8 Y. r
6 O( f+ r8 e0 V9 o& Y% O3 w$ s% p菌体大小/μm* q2 P# C5 I4 R: v& ~1 H
（0.3-0.8)×(0.6-1.0）# c. `; C6 f- a! n. D1 v) j! _0 v9 F
Φ0.3
/ m' u! G1 R6 C! s. [3 ?（0.5-0.8)×(1.3-5.0)
- n* O: ?; J4 ]( ^, \, J8 S1 _0.2×(6-60)6 C5 A$ c3 n+ G
( Q* @0 i2 q* U' V. }8 l8 |革兰氏染色, `5 m2 _# h* }! f
G% \: U; f+ c. e5 A; M0 N7 {
G
: B" W3 }. ^, |- e, m; _- rG% v% S0 M0 e% n- _2 y( z
G" v' k- Q6 a3 A" }" {& \) U/ T
; L' C b0 f7 |# q6 T初步鉴定8 X4 \: h8 O4 Q
黄杆菌属$ t- f" I0 M' x: Y) m
微球菌属
: s8 _8 d" ?! H3 k7 ^假单胞菌属+ \& X% t- R* R9 A4 ~4 `5 M
酵母菌属
) Q3 s- D' _4 Q# t! N7 A; o* _6 T# t2．2 生长条件正交试验 ZL1，ZL2菌株按设定的正交试验方案进行试验，测定其剩余含油量，以降解油量作为考察指标，计算结果见表2、表3。分析极差值R可以看出：ZL1菌的R温度为128，ZL2菌的R温度为73，均为最大极差值，说明温度是影响降解效果的主要因素。25℃ZL1菌降解机油能力较强；油质量浓度越低降解效果越好；pH值为7时，降解效果最好，说明ZL1菌适于在中性条件下生长。30℃ZL2菌降解机油能力较强；机油的质量浓度在368-767mg／L范围内对降解效果影响不大，以ρ（油）=574mg／L时降解效果最明显，还应进一步扩大试验的油含量范围以确定油含量对ZL2菌降解能力的影响；pH值在4－8范围内对降解效果的影响也不显著，其中PH值为6时降解效果最好，说明ZL2菌较适于在中性偏酸条件下生长。2.3 降解能力试验 向1L油质量浓度为270mg／L培养液中投加5g湿菌体进行间歇培养，考察ZLI，ZLZ菌的降解能力，结果见图1。由含油量与培养时间关系曲线可以看出：ZL1，ZL2菌被加人含油培养基后很快适应环境，随着培养时间的增长，含油量不断下降。ZL1菌在30h左右去除率达到最大，后含油量下降缓慢，到60h左右曲线趋于平直；ZL2菌在20h左右去除率达最大，48h左右曲线趋于平直。曲线说明ZL1，ZL2菌适应能力较强，ZL1菌在0－60h内生长旺盛对机油的去除率可达67．9％，ZL2菌在0－48h内生长旺盛，对机油的去除率高达76.2％，试验后期降解曲线趋于平直，含油量基本不再变化，可能是由于机油中的一些重组分难于降解的原因。 " ~. |, w. U, [" f
7 }0 ~4 K" P2 h9 A3 结论 % \: v4 g0 J/ t; X0 Q; Q, c: U
①石油污染土壤较适于做高效石油降解菌驯化菌源。筛选到两株高效机油降解菌ZL1，ZL2。通过正交试验得出ZL1黄杆菌属适于在25℃，油的质量浓度在424mg／L左右，中性条件下生长。ZL2微球菌属适于在 30℃，油的质量浓度在574mg/L左右，中性偏酸条件下生长。 ②温度对ZL1，ZL2菌的机油降解能力影响较大。ZL2菌的PH值、机油浓度适应范围较广，有较好的应用前景。 ③ZL1，ZL2菌对初始机油质量浓度为270mg／L培养液的去除率分别达到67.9％和76.2％，混合菌株的降解效果有待进一步研究。
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作者简介：刘勤亚（1977－），女，河北石家庄人，环境工程专业硕士在读。
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发表于 2010-2-21 20:12
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