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中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－03
* z1 S% j, I8 ~An Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, X......
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中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：1009－2455（200）06－0032－03
( K/ U& y1 s4 m4 bAn Experimental Study on Microbiological Treatment of Lubricating Oil-Contaminated WaterLlU Qin-ya, ZHOU Hai-dong(College of Environmental and Spatial Informatics, China University of Mining and Technology, Xuzhou 221008, China)
& W T) T, A6 c, e8 I" D0 n# F7 K4 S Abstract: Two strains of high-effective, lubricating oil degrading bacteria, ZL1 and ZL2, were screened out from oil-contaminated soil, which were preliminarily identified as flavobacteriun and tnicrococcus. The effects of temperature, oil content and pH value on their oil-degrading capacities were dletermined by orthogonal experiment of growth conditions. A degrading capacity experiment was carried out with an initial wastewater oil content of 270 mg/L. The experimental results showed that the oil removal rates by the strains ZL1 and ZL2 from the in-oculum in about 2 days were up to 67. 9% and 76. 2% respectively and the adaptation range of strain ZL2 to oil content and pH value was wider than that of ZL1. Key Words: lubricating oil; oil-containing wastewater; wastewater treatment; microorganism; flavobacteri-un; micrococcus 1 k& u% |7 m4 j5 ?1 w- q
近年来，国内外对石油及兵产品的微生物降解研究常见报道，却鲜见机油废水微生物降解方面的研究。本试验目的是通过常规微生物驯化方法，以市售机油为唯一碳源，从油污土壤中分离筛选出机油高效降解菌株，并对其生长条件及降解特性进行研究，以期进一步应用于含油污水的治理。 ) {& W; H2 z% y
1 材料与方法
- G" ~9 B8 c, u" X* W1．1 土壤样品 某石油库贮油罐附近的石油污染土壤，取样3份，按含油量由多至少编为1＃，2＃，3＃。1．2 培养基 本试验选取两种无机基础培养基，（用蒸馏水配制并高压蒸气灭菌），编号分别为1＃，2＃，组成如下： 1＃基础培养基：p（KH2PO4）＝0.5g／L，ρ（K2HPO4）＝0.5g／L，P（MgSO4·7H2O）=0.2g／L，ρ（NaCl）=0.2g／L，p（CaCl2）＝0.1g／L，ρ（NH4NO3）＝1.0g／L，MnSO4痕量，FeCl3痕量。 2＃基础培养基：p（NaNO3）=2.0g／L，ρ（KH2O4）＝0．2g／L，ρ（MgSO4.7H2O）＝0.2g／L，ρ（酵母浸膏）＝1.0g／L． 含油培养基是向上述无机基础培养基中加入适量机油。固体培养基中加入质量分数为0．2％的琼脂。1．3 优势菌筛分试验1．3．1 选择富集培养 称取土样各10g，加入到500mL1＃含油培养基（含机油4mL）中，调pH值7.0，通气恒温30℃培养48h后，分别移取上述培养液5mL于45mL1＃，2＃含油培养基（含机油2mL）中，恒温30℃振荡培养。1.3.2 平板分离 制作1＃，2＃固体含油培养基平板苦干，用接种环蘸取振荡培养较好的菌液在相应平板划线，恒温30℃培养48h后平板划线分离，重复数次。选择生长状况良好的菌株进行平板扩大培养。1．4 生长条件正交试验 在保证供氧和氮、磷营养前提下，选择温度。油的质量浓度（以mg／L计）和pH值作为本次实验的三个因素进行三水平实验，方案见表1、表2。将平板培养48h的菌体刮下，5000r／min离心5min，分离得到湿菌体。向方案中每个样品加入0.5g湿菌体，培养60h后测定样品中油的质量浓度。
# _" d6 U1 v( F表1 ZL1菌株正交试验方案及试验结果 . J/ S3 X+ P9 H
3 Y8 [$ N; ]3 U7 Z- a' p
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1 H* \5 \ Z0 I2 l/ m$ w/ f1 b! f# G$ b/ C0 u) c' W# F: y" G2 j
分组号5 C8 e, k: y9 o
因素4 l& f- N( _9 v0 M
测定结果ρ（油）/（mg.L-1)
8 G8 t& r& L- A/ _* ]: A! T降解测量ρ（油）/（mg.L-1)
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424
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144' O r, d: Y. |$ d
165
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1 }3 z4 |1 {9 G1 a4 @% k* S
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44
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8 T9 B, d( h8 x) r
& s$ p1 G2 l" ?, n9 m9 z
表2 ZL2菌株正交试验方案及试验结果 ( t7 `. y+ U8 d+ z3 u& K
6 z& D# b4 i% m* g0 h. L4 E. i5 `, I$ a- _: o
1 b8 l2 p; F( |2 P$ V8 c0 i+ K
分组号
1 ?3 ]0 c/ o* n因素
$ j+ j T* T9 q: O% b' p, E测定结果ρ（油）/（mg.L-1)
9 D8 a- G: \ i' r, i% x3 _ j降解测量ρ（油）/（mg.L-1)
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6 T$ k @1 X2 ?) V7 m温度/
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25
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6.0
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4.0
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1 U9 X) g' }2 p1 \% e. l1 e264
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25
1 ]" m/ r* m" x" g: Y% I, }' k8 s
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2 {. {' V& U2 `3 D: [& _* f1.5 降解能力试验 配制机油质量浓度为270mg／L的含油培养基1L，投入小型间歇反应器中，加入离心分离得到的湿菌体5g，通气恒温30℃培养，间隔12h取样测定其含油量。1．6 测试方法 用紫外介光光度法测定。
) m+ z8 m5 X0 |* [; f/ n/ F2 {2 结果分析 : [; z u0 B* i& K& G& _ g! g
2．1 优势菌筛分试验 富集培养过程中，1＃土样的培养液出现的泡沫较多，乳化现象明显，菌液也较为粘稠，分离出较多的菌株，说明土壤中的石油烃能刺激石油降解菌的生长。经过选择富集培养、平板分离出4株以机油为唯一碳源的菌株，编号为ZL1，ZL2，ZL3，ZL4，性状见表3。进一步培养后筛选出降解性能较好的ZL1（1＃培养基）和ZL2（2＃培养基）进行正交试验和连续培养试验。
6 `. E6 A- r. j表3 4株机油降解菌形态特征 . `, L x! c( C# I5 l! A
y2 S$ p- p& M9 s: P3 e
3 g, C5 l& _7 i* e4 X7 V4 ~+ n* @& x- U; C7 k" E" Z9 o
$ W+ P' ~1 X! x; ~
形态特征
+ e& L0 Y5 Y P$ q& IZL1
* N/ n: `+ A5 dZL2( a' i+ T/ t0 A4 a9 b
ZL3
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. K" Z* _! J: F3 ^
菌落颜色
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淡黄) X& f6 [+ W4 [+ z
淡黄
+ V) r i4 Y9 d) C$ G粉红& {+ i2 f7 t7 z5 M
7 ]# V! Q* K' V% y- `5 M# H, D菌落形态
+ r ]$ n* w; I" ], s u不透明，微隆起，全缘，
( F! ^) o& {1 F$ @8 K+ r; e5 [半透明，圆形
: {' Z5 z& M% @* c/ K! @0 {' l6 ?7 c半透明，圆形，隆起，
8 i [/ c) K' u不透明，米粒状突起，
$ u j9 G/ W' w2 x. x4 b/ a( w/ b$ N! f, d* e
& K! N- [7 p) D8 W光滑，有光泽/ A( `6 ^, j ]8 R, ~1 D
光滑，较干燥, j/ M) l: y I. y
光滑，有光泽
$ f- v+ I+ j0 f' B3 ?较湿润
1 V' x5 [) k; y0 _7 x! J
( G# F% s, ~% Y菌体形态
' |4 g T; \5 r0 l短杆$ I. o' O1 H, q6 _& y$ H
球形
% K0 Y" u' V8 u! y: S杆状: W2 U6 O- y5 L( L& p0 a9 d
丝状
I. {( K- W" w3 t8 P% q8 |7 ~7 z6 f
菌体大小/μm/ Y7 l9 u) M/ A1 Z+ P* ?
（0.3-0.8)×(0.6-1.0）
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3 @# V2 m* B8 A（0.5-0.8)×(1.3-5.0)
& ~ g7 d* Q* u% ^: W G) X( b0.2×(6-60)
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G: a. n* b! c1 a K1 a( Y
G
0 T7 x. {# Q/ K6 DG- j3 B! }& D! H' N1 a
G
0 o6 e* e% |4 ~- P4 I$ u. o/ f0 X. f6 r4 j# x
初步鉴定
! a3 d/ h6 q0 x) x9 {8 |1 N( \黄杆菌属
# e4 ^( n- M$ l: H8 d t7 y; C7 d微球菌属& b7 X) ]( g6 F5 S. R
假单胞菌属8 X, V3 }4 e4 T
酵母菌属. k% u+ J, x( w% t8 }8 G; Y0 E+ G
2．2 生长条件正交试验 ZL1，ZL2菌株按设定的正交试验方案进行试验，测定其剩余含油量，以降解油量作为考察指标，计算结果见表2、表3。分析极差值R可以看出：ZL1菌的R温度为128，ZL2菌的R温度为73，均为最大极差值，说明温度是影响降解效果的主要因素。25℃ZL1菌降解机油能力较强；油质量浓度越低降解效果越好；pH值为7时，降解效果最好，说明ZL1菌适于在中性条件下生长。30℃ZL2菌降解机油能力较强；机油的质量浓度在368-767mg／L范围内对降解效果影响不大，以ρ（油）=574mg／L时降解效果最明显，还应进一步扩大试验的油含量范围以确定油含量对ZL2菌降解能力的影响；pH值在4－8范围内对降解效果的影响也不显著，其中PH值为6时降解效果最好，说明ZL2菌较适于在中性偏酸条件下生长。2.3 降解能力试验 向1L油质量浓度为270mg／L培养液中投加5g湿菌体进行间歇培养，考察ZLI，ZLZ菌的降解能力，结果见图1。由含油量与培养时间关系曲线可以看出：ZL1，ZL2菌被加人含油培养基后很快适应环境，随着培养时间的增长，含油量不断下降。ZL1菌在30h左右去除率达到最大，后含油量下降缓慢，到60h左右曲线趋于平直；ZL2菌在20h左右去除率达最大，48h左右曲线趋于平直。曲线说明ZL1，ZL2菌适应能力较强，ZL1菌在0－60h内生长旺盛对机油的去除率可达67．9％，ZL2菌在0－48h内生长旺盛，对机油的去除率高达76.2％，试验后期降解曲线趋于平直，含油量基本不再变化，可能是由于机油中的一些重组分难于降解的原因。
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3 结论
; A% q6 c( n' l; \9 H& e+ Y ①石油污染土壤较适于做高效石油降解菌驯化菌源。筛选到两株高效机油降解菌ZL1，ZL2。通过正交试验得出ZL1黄杆菌属适于在25℃，油的质量浓度在424mg／L左右，中性条件下生长。ZL2微球菌属适于在 30℃，油的质量浓度在574mg/L左右，中性偏酸条件下生长。 ②温度对ZL1，ZL2菌的机油降解能力影响较大。ZL2菌的PH值、机油浓度适应范围较广，有较好的应用前景。 ③ZL1，ZL2菌对初始机油质量浓度为270mg／L培养液的去除率分别达到67.9％和76.2％，混合菌株的降解效果有待进一步研究。 ; H8 @ c, {( P) b6 S" p
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作者简介：刘勤亚（1977－），女，河北石家庄人，环境工程专业硕士在读。+ i% e; G$ e6 ~: Y9 T9 h
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狗仔卡
发表于 2010-2-21 20:12
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